藻类叶绿素的检测方法

1.  方法要点:
叶绿素a的测定是监测水体中浮游生物现存量,其方法简便,快捷;其方法为一个常用的测定浮游植物现存量方法,而且,叶绿素a值通过一定的换算,也可指示初级生产量的大小.

2.  试剂
丙酮溶液: 90%的丙酮溶液;
滤 膜: 玻璃纤维滤膜Whatman GF/C或相应的混合纤维酯微孔滤膜.(孔径0.7μm)

3.  仪器设备
752型分光光度计;抽滤装置;离心装置

4.  测定步骤
4.1  水样的保存
通常我们采集深度为0.5m和1m的混合水样2L左右,注入水样瓶中,于阴暗处保存,如果
水样不能及时处理,应放在低温(0-4°C)下保存;
4.2  抽滤
摇匀水样并准确量取水样0.1-1L(取样体积视水样中浮游植物的多少而定).在滤器上放入滤膜,将水样倒入滤器中抽滤,并冲洗量筒两次,洗液一并倒入滤器,还应注意不能在滤器壁上粘附浮游植物,一并用洗瓶冲下.抽滤完毕后,用镊子取下滤膜,将其对折(有浮游植物的一面朝内),再用普通滤纸吸压,尽量去处滤膜上的水分;置于黑暗低温条件下保存.如需保存较长时间(30天)的话,则应置于-20°C下.
4.3  提取
样品先经过研磨可以提高其色素提取效果.将滤膜剪碎,放入研钵,加入2-3ml90%的丙酮
提取液,充分研磨至糊状.将研磨好的样品倒入离心管中,用少量丙酮冲洗研磨用具,洗液也倒入离心管中,使最后的体积不超过10ml..盖上塞子置于4°C冰箱中过夜抽提,时间为20-30小时
4.4  离心
将装有提取液的离心管平衡后放入离心机中,转速调节为4000rpm,时间为10min,将上清
液转入定量比色管中,再用少量90%的丙酮溶液冲洗底部沉淀,摇匀后再次离心,上清液并入比色管中最后定容至10ml.如果有大批样品需立即同时处理,可省去研磨离心步骤,直接在提取液中浸泡24-36h,取清液测定.
4.5 比色
先用少量丙酮溶液润洗光程为1cm的比色皿.读取波长为665nm和750nm两处的光密度.注意使提取液在665nm处的读书应在0.1-0.8之间;750nm处读书在0.015以下.然后再加入1滴1mol/LHCl溶液至比色皿中,待充分酸化后(1-2min)再测665nm和750nm处光密度值.

5.结果计算

Chla=(Eb-Ea)xRxKxVe/(R-1)xVxI

其中:Chla —-水样中叶绿素a的含量,mg/m3或者μg/l;
Eb —-提取液酸化前665nm和750nm处光密度差;
Ea —-提取液酸化后665nm和750nm处光密度差;
R —-最大酸比,R=Eb/Ea.目前采用R值为1.7;
Ve —-提取液的总体积,10ml;
V—-抽滤水样的体积,L;
I —-比色皿的光程,1cm;
K—-叶绿素a在665nm处的比吸光系数的倒数乘以1000,在丙酮提取液中的比吸光系数为89,故K=1/89*1000=11.24.

注:本方法引自中国生态系统研究网络观测与分析标准方法<<湖泊生态调查观测与分析>>,中国标准出版社

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