FAQ: 细胞样品流式分析前期处理步骤

  1. 离心去除培养基,灭菌海水洗涤一次
  2. 加入1 mL的磷酸盐缓冲液(1×PBS)重悬,再加入700 μL的70%乙醇,-80℃储存备用
  3. 实验前离心,加入70%乙醇反复洗涤去除色素至上清无色
  4. 向沉淀中加入1 mL的PBS洗涤去上清,再加入1 mL用PBS配置的0.3% Triton X-100,室温下静置40分钟,离心,PBS洗涤,重悬,向重悬液中加入4 μL的RNase A,37℃水浴1小时,PBS洗涤,重悬,再加入10 μL的2.5 mg/mL碘化丙啶(PI)溶液,室温遮光10分钟
  5. FL3通道检测DNA含量,激发光波波长520 nm,收集30,000个细胞,用MultiCycle软件计算细胞处于G1,S,G2+M期的相对百分比,运行Win MDI 2.9软件对实验数据进行分析。

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