Hunter微量元素溶液配置方法

TAP培养基是比较难配置的藻类培养基之一,其中的Hunter微量元素贮存液(Hunter’s trace elements)是非常常用的微生物培养基添加剂,为微生物的生长提供必需的微量元素。Hunter’s微量元素溶液配方是Hunter等人1950年发表的,至今配方在很多不同微生物培养基中都有使用,包括衣藻、曲霉等。Hunter微量元素贮存液常用来配制基础培养基。

Hunter’s trace elements配制起来十分复杂,且由于其中有易氧化的亚铁离子和二价锰离子,因此有效的配制方法非常重要,否则配制出来的溶液则起不到应有的效果。

 

Hunter’s微量元素溶液配方与配制方法

1000X Hunter微量元素溶液的配方如下:

Hunter's trace elements Stock

Hunter’s trace elements Stock

标准配制方法:
1. 除EDTA外,将以上溶液混合,加热煮沸,加入EDTA溶液。此时溶液应该为绿色。
2. 待温度降至70度时,加入80ml 20%氢氧化钾溶液(预热)。
3. 待溶液温度冷却至室温时定容至1L 。
4. 用锥形瓶盛装配制好的Hunter’s trace elements,用棉花塞堵住瓶口。每天晃动一次,使空气流通。或用10ml移液管反复吹打溶液,效果更佳。如此持续1~2周。
5. 用两层滤纸过滤Hunter微量元素贮存液,滤出溶液应该是清澈的,否则再过滤一次,直到最终溶液澄清为止。
6. 将溶液分装后低温保存。此方法法可放大。

新配的Hunter微量元素溶液是浅绿色,透明,放置一段时间后逐渐变成深红色,最终为紫色,并且在溶液底部生成铁锈色沉淀。如果没有沉淀生成,检测pH,用氢氧化钾或盐酸调节至6.7。

Hunter’s trace elements终溶液应该是波尔多酒红色,或枣红色。但pH的微小变动会影响溶液颜色。作者补充说,自己曾配制过一批葡萄紫色的,并没有影响效果。

Scott和Kafer对Hunter微量元素溶液的配制方法做了改良,以下是改良后的配制方法:

Hunter's trace elements SolutionA

Hunter’s trace elements SolutionA

溶液A的配制:
1. 称取以上组分,按照给出的顺序,依次加入到80ml去离子水中。不能用自来水,不能用纯净水!
2. 用KOH颗粒调节pH至5.5。不能用氢氧化钠调节pH!

配制好的溶液A呈金黄色,透明。

Hunter's trace elements SolutionB

Hunter’s trace elements SolutionB

溶液B的配制:
称取以上组分,按照给出的顺序,依次加入到80ml去离子水中,温和加热搅拌至完全溶解。
将溶液A和溶液B混合,先用KOH颗粒,再用KOH溶液调节pH至6.5,定容至200ml。放4度冰箱中保存。不能用氢氧化钠调节pH!

Hunter’s trace elements终溶液配制方法

与传统配制方法一样,刚刚配制好的溶液呈浅绿色,透明。放置2周后Hunter微量元素溶液应该变成紫色,但不会形成沉淀。此时溶液才能使用。即使有沉淀形成也不会影响使用,相反,有沉淀存在效果会更好。如果没有以上现象出现,弃掉,重新配制。

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