藻类计数和生长曲线的制作方法

综合一些资料和经验,介绍接种藻类计数的方法,以扁藻为例介绍几种计数方法和生长曲线制作方法

1、细胞计数法
计数板计数法:混匀藻液,取出一定量的藻液,滴入一滴甲醛固定扁藻细胞,用血球计数板计数,每个样品须重复测定3次,计算每毫升藻液所含细胞数的平均值。每毫升藻液所含的细胞数(细胞密度)按下式计算:
每毫升藻液细胞数=计数平均值×10,000×稀释倍数 (2-1)
2、干重法
取一定体积的藻液,用玻璃纤维滤纸(Whatman GF/C)过滤获得藻细胞沉淀,将沉淀放入80℃烘箱中烘干至恒重,称量,藻细胞的质量即等于称量结果减去滤纸的质量。
3、光密度法
混匀藻液,取3 ml藻液放入1 cm光径比色皿中,以不含扁藻细胞的培养基为空白对照,在Jasco V-530型紫外可见分光光度计下取其特征吸收峰测定OD值(绿藻一般为680,665,450 nm)。

先稀释出不同浓度的藻液,用分光光度计测定其吸光度值,然后根据各组数据生成工作曲线,之后就只用测吸光度了。关键还是要选择合适的波长,培养液最好不要有杂色。硅藻含类胡萝卜素较多,用440nm就可以。

 750nm可以排除叶绿素和类胡萝卜素的干扰。

吸光度测出来数据要求跟细胞密度有关,细胞在各个时期的叶绿素含量是不同的,细胞密度也是不同的,680测出来就乱了。

参考文献:Interference by pigment in the estimation of microalgal biomass concentration by optical density
 

 如果做生长曲线的话可以每天的同一时候取样,也可以隔天取样。  我们用1mL的藻液就够了, 必要时候600微升都行,不能再少了。

 

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