1、富集培养基： 

经典的紫色非硫细菌（红螺菌）的富集培养基的配方为：NH4Cl：0.1g； NaHCO3：0.1g；K2HPO4：0.02g；CH3COONa：0.1~0.5g；MgSO4·7H2O：0.02g； NaCl：0.05～0.2g； 生长因子1ml，蒸馏水97ml，微量元素溶液1ml，pH为7.0。

其中，①5％NaHCO3水溶液，过滤除菌取2m1加入无菌培养基中。②生长因子：维生素B10.001mg、乙尼克丁酸0.1mg、对氨基苯甲酸0.1mg、生物素0.001mg，以上药品溶于蒸馏水中，定容至10ml，然后过滤除菌。③微量元素溶液：FeCl3·6H2O ：5mg；CuS04·5H2O：0.05mg；H3BO4lmg；MnCl2·4H2O：0.05mg；ZnSO4·7H2O：1mg；Co(NO3)2·6H2O： 0.5mg。以上药品分别溶于蒸馏水中，并定容至1000m1。

除①、②、③外，各成分溶解后100 Pa灭菌20min。然后分别加入①、②、③，如加入0.1％～0.3％的蛋白胨则能促进该菌生长。

2、分离培养基：

传统的红螺科分离培养基的配方为：NH4Cl：0.1g； MgCl2：0.02g； 酵母膏：0.01g； K2HPO4：0.05g； NaCl： 0.2g； 琼脂2g，蒸馏水90ml。100Pa灭菌20min。

灭菌后，无菌操作加入经过滤除菌的0.5g/5mlNaHCO3，再无菌加入过滤除菌的0.1g或0.1mlNa2S·9H2O（降低培养基的氧化还原值），最后再加入5ml经过滤除菌的乙醇、戊醇或4％丙氨酸。用过滤灭菌的0.1mol/H3PO3调pH至7.0。

3、筛选富集培养基

           NH4Cl 1g/L, NaHCO3 1g/L, CH3COONa 3g/L, KH2PO4 0.3g/L, MgSO4 0.1g/L, 酵母膏0.5g/L, 微量元素母液1g, 自然pH值。扩大培养培养基以海水代替微量元素母液。1000~4000lx光照, (30±2)℃恒温培养。

参考文献：固定化海洋光合细菌处理生活污水的研究*   黄宝兴,李兰生,赵亮,张微,唐迎迎    海洋湖沼通报

4、基础培养基

NH4Cl:1g; Na2HPO4: 0.5g; MgSO4: 0.2g; NaCl: 2g; NaHCO3: 5g; 酵母膏:2g ; 乙醇2ml，用 0.1N H3PO4调至pH7.0。

划线培养基:采用固体琼脂培养基，即在基础培养基的基础上添加1.0%的琼脂。

以上培养基初始pH值均用H3PO4调至7.0，经121℃灭菌30分钟，NaHCO3过滤除

菌后加入。培养条件:光照培养箱温度控制在30℃、光照强度控制在 3000uE.m-2s-1培养。

光合细菌是一种兼性嫌气细菌，需要深层培养或在真空干燥器内达到嫌气或半嫌气状态，一般将混合菌放入培养液中先富集再分离。具体方法:将混合菌装入 10ml试管中，加入培养液充满至刻度，盖上胶塞，在光照条件下保持在30℃左右培养。待培养液出现红色后，取培养液加1.5%的琼脂，制成固体培养基，取菌液分别用无菌水以10-100000000倍稀释，分别取lml样本涂在平皿上，光照、30℃培养2d左右在平板上长出菌落。移至平板采用划线法进行分离，将划好线的平板倒置，在相同条件下培养，反复分离纯化，挑取不同特征的菌落，用斜面保存，纯化分离后的菌种置于冰箱保存备用。

PSB 培养中除碳、氮、磷等主要营养元素外，还需要一定量的镁、钙、钠和有关的微量元素，将所需的营养元素按一定的比例配成适于菌体生长繁殖的培养基。本实验室采用酵母膏、蛋白胨培养基，基本配方为:CaCl2 0.3g，MgSO4·7H2O 0.5g，酵母膏3g，蛋白胨3g，蒸馏水1000ml，pH: 6.8. 如需制固体培养基再加2%琼脂。培养温度：25℃～30℃最佳，光照强度：2000LX～5000LX，PH：7.5～8.5最佳。

把菌种接种到灭好菌的培养基中，在三角瓶中进行二级培养，每天摇晃几次。把 40L 的反应器中加满自来水，放入通气管，盖上保鲜膜一起用次氯酸杀菌消毒24小时，用硫代硫酸钠（1L次氯酸需要150g硫代硫酸钠）来中和。以15%的接种量接入反应器中，用泵通气培养，用分光光度计跟踪测量菌液的密度，得到菌液的密度较高，而且反应器还可以进一步放大。

5、细菌生长培养基

NaCOOH3.0g.酵母膏3.0g，NH4CL2.0g，KH2PO4 0.5g，天然海水1000ml，高温灭菌。

100ml具塞容量瓶中装有50ml光合细菌培养基，按10%接种量接种母液（约每毫升10亿个细胞）混合均匀后置于恒温光照培养箱中光照厌氧培养，光强2500Lux，温度30摄氏度。

6、HCH光合细菌培养基

灭菌条件

（1）高压蒸汽灭菌 小件玻璃器皿、培养基等采用湿式高压蒸汽灭菌。这种灭菌方式可以达到彻底的灭菌。灭菌条件：0.103 MPa，120 ℃，20min。

（2）紫外灭菌 无菌操作台采用紫外灭菌方式，用紫外灯灭菌 30min。该种方式对空气进行灭菌。

光合细菌的纯培养

本课题研究所用光合细菌为 Z08，除特殊说明外，皆是由纯培养获得。将 50 mL HCH 培养基灌装于 250 mL 三角瓶，用封口膜将瓶口密封，以防止灰尘和杂菌进入。灌装好的培养基采用高压蒸汽灭菌 20 min。待冷却以后，在无菌操作台中接种 OD660=1.0（干重 840 mg/L）的 Z08 15 mL。接种后将菌液放置在 140 rpm 的恒温摇床中培养，控制温度 30 ℃，24 h 照明，照度 500—1000 lx，培养 48 h 达到稳定期。培养后的光合细菌保存在 4℃条件下备用。

红色非硫光合细菌富集培养基的配制: NaHCO3 1.0 g; NH4Cl 1 g; K2HPO4  0.2 g;CH3COONa 1.0~5.0 g;MgSO4·7H2O 0.2 g; NaCl 0.5~2.0 g;酵母浸汁0.1 g;微量元素10 mL。

将上述成分溶于蒸馏水中,调节pH至7.0,定容1000 mL。在115℃下灭菌20 min。

光合细菌的分离与培养

① 液体富集培养基：CH3COONa 3.0 g ，CH3CH2COONa 0.3 g，NaCl 1.0 g，(NH4)2SO4 0.3 g，MgSO4·7H2O 0.5 g，K2HPO4 0.7 g，CaCl2 0.05 g，MnSO4 0.0025 g，FeSO4 0.005 g，酵母膏 0.1 g，谷氨酸 1.0 g，蒸馏水定容至 1 L，调 pH 至 7.4。

② 固体分离培养基：CH3COONa 3.0 g·L-1，酵母膏 3.0 g·L-1，CaCl2 0.3 g·L-1，MgSO4·7H2O 0.5g·L-1，琼脂 20 g·L-1，调 pH7.4。

培养条件：取少量活性污泥样品于装有 120 mL 富集培养基的 125 mL 血清瓶中富集，置于光照培养箱中 30 ℃培养，照度为 2000 1x。6~9 d 后，液体培养基变为红色，经摇床振荡稀释处理后，涂布和划线于平板固体培养基上，置于恒温培养箱中黑暗好氧培养，7 d 后获得单菌落。在平板固体培养基中重复划线 3 次以上，直到在显微镜下观察为纯菌。

7、RCVBN扩大培养基

优化培养实验采用RCVBN扩大培养基,其组成为:CH3COONa 3.0g, (NH4)2SO4 1.0g, MgSO4 0.2g, NaCl 1.0g, KH2PO4 0.3g, K2HPO4 0.5g, CaCl2 0.05g, 酵母膏0.1g, 微量元素溶液1mL, 蒸馏水1000mL.

微量元素溶液为改良的Imhoff和Truper生长因子溶液,其组成为: EDTA-2Na 2g, FeSO4·7H2O 0.2g, MnCl2·4H2O 0.1g, H3BO3 0.1g, CoCl2·6H2O 0.1g, ZnCl2 0.1g, Na2MoO4·2H2O 0.02g, NiCl2·6H2O 0.02mg, CuCl2·2H2O 0.01g, 蒸馏水1000mL。

培养方法

在8个CSTR光合培养器中进行分批培养,培养器体积为50 L。培养器光照根据强度不同的需要分别由三只25W,40W,60W,100W白炽灯泡组合提供,培养器的底部设有穿孔曝气管,根据DO含量间歇开启,培养器内设有温控器。

8、光合细菌参考培养基

无水乙酸钠5mg，氯化铵1.0mg，磷酸氢二钾0.2mg，MgSO4·7H2O 0.2mg， 碳酸氢钠1.0mg，酵母浸膏0.1mg，氯化钠1.0mg调节pH为7.1-7.2, 1.05Mpa，121摄氏度灭菌20分钟，固体培养基为液体培养基基础上添加15-20%琼脂