固定液和保存液配置方法

用固定液固定动植物整体或它的一部分组织和气管等,能保存组织内细胞的形态、结构及其组成,尽量使它近于生活状态。固定液一般有防腐和保存的作用,分为单纯固定液和混合固定液。单纯固定液中最重要的有乙醇、福尔马林、醋酸、苦味酸、铬酸、重铬酸钾、升汞等,前两种固定液是中学生物实验室常用的。单纯固定液的优点是简便,缺点是有一定的局限性,不易达到理想的固定要求。混合固定液有几种不同的药液按一定的比例混合而成,使各自的优缺点相互补充,成为较完美的固定液。这种固定液的制备虽比较麻烦,但是效果比较好。常用的混合固定液是醋酸-酒精混合液、福尔马林-醋酸-酒精液、包因氏固定液等。

常用的保存液大致跟固定液相同,主要是福尔马林、酒精、甘油以及由这些药物按比例配制成的各种混合液。有时按特殊保存的需要,再保存液中增加某些药品(如原生标本的保存液)。

1、福尔马林

福尔马林在固定组织标本时杀菌能力强,所以防腐性强,渗透力大,固定得快。永福尔马林固定精细的解剖标本时,要跟甘油、酒精、石炭酸等混合使用。
固定液常用的浓度是5~10%(根据材料的大小、性质和数量而定)。
保存液常用的浓度是5~10%。用福尔马林作保存液,效果好且价格低廉。
在配制福尔马林溶液(固定液或保存液)时,应将37~40%的甲醛作为整个溶质来配。例如配制5%福尔马林是取市售37~40%甲醛溶液5毫升跟95毫升蒸馏水混合。实际上甲醛含量只有1.9~2%,这样的配法已成为一般实验室常用的惯例。
注意事项:
(1)福尔马林业在长期贮存中会产生蚁酸,可适量的加入碳酸钙( )或碳酸镁( )等碱性物质进行中和。
(2)福尔马林业作为保存液会慢慢挥发而致使浓度降低,并且福尔马林液再保存中往往形成多聚甲醛,使浸液变浊,影响观察。所以,根据一定保存期的情况,可适当增加福尔马林液的浓度或更换新液,以防标本变坏。其中如有白色沉淀物,加热后可使它溶解。
(3)市售的福尔马林液常带有酸性,能腐蚀石灰质,因此,最好不用福尔马林液浸制有石灰质外壳的动物。

2、酒精(乙醇)

酒精也是常用的固定液,它有强烈的杀菌作用,对组织材料的渗透力较大,固定的快。但是,它的脱水作用较强,在高浓度的酒精中容易使材料显著硬化和收缩。一般用于固定浸制标本材料,分一级或二级固定,即70%或50%与70%的酒精。有些小型材料或精细的解剖材料,最好用二级或三级固定,即用50%、70%或50%、60%、70%的酒精,最后再进行保存。从经济效果来考虑,一般酒精应跟福尔马林液等固定液混合使用。
市售的工业用酒精浓度是95%左右,因此用时要重新配制。保存液的浓度通常是70%。
注意事项:
(1)在固定材料时要注意固定的效果,小型材料一般放在固定液中固定。大型材料必须先往体内注射一部分固定液,再放入固定液中,防止材料内部腐怀变质。用福尔马林液固定也是如此。
(2)高浓度的酒精有脱水、脱脂作用。含有多量脂肪或拟脂标本(如脑、脊髓)等都不宜用较高浓度的酒精作保存液。
(3)为了防止酒精使标本硬化,保存一些精细的材料或解剖标本时,因加入少量甘油,因为甘油具有润软组织的作用。
(4)忌跟铬酸、锇酸和中铬酸钾等氧化剂配合。

3、醋酸

醋酸即乙酸,纯醋酸在低于16.7摄氏度时会凝成冰状固体,所以叫冰醋酸。醋酸能很快穿透组织,因为它不能沉淀细胞质中的蛋白质,组织不会硬化。一般常跟酒精、福尔马林、铬酸等容易引起组织变硬和收缩的液体混合,以起到相互抵消的作用。
醋酸固定液的常用浓度是0.3%~5%。

4、苦味酸

苦味酸是一种黄色结晶,能溶于水(溶解度是0.9~1.2%)、酒精(溶解度是4.9%)和苯(溶解度是10%)。苦味酸也能沉淀一切蛋白质,穿透较慢,固定后,组织收缩明显,但不使组织硬化。
苦味酸固定液可以在100毫升蒸馏水中加入苦味酸约1.5克,制成饱和水溶液。固体苦味酸易爆,长制成饱和水溶液保存。

5、升汞

升汞又叫氯化汞,是白色粉末,以针状结晶为最纯。通常固定时用饱和水溶液,有时也用70%酒精作溶剂,不单独用作固定剂。升汞的穿透力较弱,通常用于小型材料,对蛋白质有强烈的沉淀作用,硬化程度中等。
固定液用饱和溶液,浓度约为7%。

6、卡尔氏(Carl’s)液

配方
95%酒精 170毫升 蒸馏水 280毫升
福尔马林 60毫升 冰醋酸 20毫升
冰醋酸要在临用前加入。
这时极好的昆虫保存液,常用来杀死和保存小型、身体柔软的种类入螨、蜈蚣、马陆等。在这溶液里加入少量甘油,能防止虫体变脆。

7、卡诺氏(Carnoy’s)液

配方
纯酒精 6份 冰醋酸 1份
氯仿 3份
这种固定液能固定细胞质和细胞核,尤其适宜于固定染色体,所以多用于细胞学的质片,还用来固定腺体、淋巴组织以及原生动物的胞壳等。这种固定液穿透得快,因此一般小块组织固定20~40分钟,大型材料不超过3~4小时。固定后用95%或纯酒精洗涤,换液两次,移到石蜡中或用80%酒精保存。

8、吉尔桑氏(Gilson)液

配方
60%酒精 50毫升 冰醋酸 2毫升
80%硝酸 7.5毫升 升汞 10克
蒸馏水 440毫升
这是常用的固定液,适用于肉质菌类,特别是柔软胶质状的材料如木耳等,也广泛用于无脊椎动物和一般组织和蛙胚的固定。固定时间18~20小时,然后用50%酒精冲洗材料,除去升汞。如果用水冲洗,会使材料膨胀。混合液保存24小时后失效。

9、福尔马林–醋酸–酒精溶液(FAA)液

配方
50%酒精 85毫升 福尔马林 10毫升
冰醋酸 5毫升
这种固定液适用于固定一般植物茎、叶组织,昆虫和甲壳类动物。液组织在这溶液里固定12小时,木质化组织要固定1周,材料也可在此液中长期保存。固定后的材料放在50%酒精中冲洗1~2次。

10、克来宁堡氏(Kleinenberg’s)液

配方
在20%硫酸水溶液内加入苦味酸,直到饱和。
这种固定液适用于鸡胚的固定,也用于许多小型海洋生物的固定。

11、包因氏(Bouin’s)液

配方
苦味酸饱和水溶液 75毫升 冰醋酸 5毫升
福尔马林 25毫升
这是常用的良好固定剂,渗透迅速,固定均匀,组织收缩少,染色后能显示一般的微细结构。一般动物组织、无脊椎动物的卵和幼虫以及一般组织学、胚胎学的材料,如植物组织的根尖和胚囊都可用它来固定。一般组织固定24~48小时,小块组织固定4~16小时,动物材料能在这种固定液中长期保存。固定后,动物材料用70%酒精冲洗净苦味酸,到无黄色为止(用酒精冲洗时,加几滴氨水,可加快除去黄色);植物材料用20%酒精冲洗几次。

12、绍丁氏(Schaudinn’s)液

配方
甲液 升汞饱和水溶液 66毫升
95%酒精 33毫升
乙液 冰醋酸 1毫升
甲、乙液要在临用前混合。
这种固定液适用于固定有鞭毛的原生动物、植物的精子和游动孢子等。材料如制作涂布装片,可在40摄氏度下固定10~20分钟。

13、眼球固定液

配方
丙酮 40毫升 冰醋酸 1.5毫升
升汞 2克 甲醛 10毫升
蒸馏水 40毫升
这种固定液适用于眼球的固定,并可在固定液中长期保存。

14、纳瓦兴氏(Nawaschin’s)液

配方
甲液 铬酸 1.5克 冰醋酸 10毫升
蒸馏水 90毫升
乙液 福尔马林 40毫升 蒸馏水 60毫升
临用前将等量甲、乙液混合。
高等植物有丝分裂材料适宜在这种固定液里固定或长期保存。

15、绿色标本保存液

配方一
硫酸铜 5克 水 95毫升
这种保存液适用于绿色植物和一切植物绿色部分的保存。植物放入硫酸铜液后,由绿变黄,再由黄变绿。这时取出材料,用清水漂洗干净,浸在5%福尔马林液内长期保存。
配方二
硫酸铜 0.2克 95%酒精 50毫升
福尔马林 10毫升 冰醋酸 5毫升
水 35毫升
先把硫酸铜溶于水中,然后加入配方中的其他组分。绿色标本能长期的贮存在该液中。
配方三
醋酸铜 15~30克 50%醋酸 100毫升
在50%醋酸中逐渐加入醋酸铜,直到饱和。适用时取原液1份,加水4份,即成稀释的硫酸铜溶液。
这种保存液适用于表面有蜡质、蛙质、质地较硬的绿色植物保色。加热稀释到醋酸铜溶液,放入植物,轻轻翻动,到植物由绿转黄再转绿色时取出植物,用清水漂洗后,浸入5%福尔马林液内保存。

16、红色标本保存液

配方一
甲液 硼酸 3克 福尔马林 4毫升
水 400毫升
乙液 亚硫酸 2毫升 硼酸 10克
水 488毫升
把红色的果实浸在甲液里1~3天,等果实由红色转深棕色时取出,移到乙液里保存,同时在果实内注入少量乙液。
配方二
氯化锌 2份 福尔马林 1份
甘油 1份 水 40份
先把氯化锌溶解在水里,然后加入配方中其他组分。溶液如果浑浊而有沉淀,应过滤后使用。红色果实能在此液中保存。

17、黄色标本保存液

配方一
甲液 硫酸铜 5克 水 95毫升
乙液 6%亚硫酸 30毫升 甘油 30毫升
95%酒精 30毫升 水 900毫升
先把植物标本在甲液中浸1~2天,取出洗净后,浸入乙液中保存,同时在果实内注入少量乙液。
配方二
6%亚硫酸 568毫升 80%酒精 568毫升
水 450毫升
植物材料能在这种保存液中长期保存。

18、紫色标本保存液

配方一
95%酒精 20毫升 福尔马林 20毫升
水 60毫升
使用时,取1份原液加9份水稀释,植物材料能在这溶液中保存。

配方二
食盐饱和水溶液 30毫升 水 175毫升
福尔马林 20毫升 甘油 少量
植物材料能在这溶液中保存。

19、白色标本保存液

配方一
甲液 5%硫酸铜溶液
乙液 1~4%亚硫酸溶液
全白色植物材料能浸在乙液中保存。杂有绿色的白色植物材料先浸在5%硫酸铜溶液内1~3天,用清水漂洗后浸在乙液中保存。
配方二
氯化锌 32克 95%酒精 125毫升
水 1000毫升
把氯化锌溶于水中,再加入酒精。植物材料能在这溶液中保存。

20、绿色幼虫保存液

甲液 福尔马林 4毫升 醋酸铜 1克
硝酸钾 1克 水 100毫升
乙液 甘油 20毫升 醋酸钾 10克
福尔马林 1毫升 水 100毫升
先把昆虫幼虫放在80摄氏度热水中烫死,晒干后放在甲液中固定1星期左右,最后放入稀释一倍的乙液中保存。
配方二
甲液 95%酒精 90毫升 甘油 2.5毫升
福尔马林 2.5毫升 冰醋酸 2.5毫升
氯化铜 3克
乙液 冰醋酸 5毫升 福尔马林 4毫升
水 100毫升
将绝食1~2天的幼虫,用注射器从肛门向体内注射甲液,12小时后转入乙液内保存,约20天更换1次乙液。

21、黄色幼虫保存液

甲液 苦味酸饱和液 10毫升 冰醋酸 5毫升
福尔马林 2.5毫升
乙液 与绿色幼虫保存液配方二乙液相同
用注射器从幼虫肛门内注入甲液,12小时后转入乙液内保存。

22、红色幼虫保存液

硼砂 2克 50%酒精 100毫升
昆虫幼虫能在这溶液中保存。

23、动物内脏原色保存液

甲液 福尔马林 200毫升 硝酸钾 15克
醋酸钾 30克 水 1000毫升
乙液 甘油 200毫升 醋酸钾 100克
麝香草酚 2.5克 水 1000毫升
先把材料放在甲液内固定,固定时间根据材料的大小而定,一般需1~5天。当材料失去自然色泽而呈暗褐色时,用手轻轻挤压,直到没有淡红色血水流出时,取出材料,用清水冲洗,在浸在85%酒精中3~24小时(不能太久,否则易破坏色素),到血色恢复后,浸在乙液中保存。

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